mirna引物设计要求（mirna引物设计原理）

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1、miRNA引物设计（茎环法+染料法检测）设计方法：通用茎环后端加miRNA后面6个碱基的反向互补序列为反转录引物，正向引物为miRNA去除后面6个碱基的序列，反向引物在茎环上。

2、反转录茎环通用序列：GTCGTATCCAGTGCGTGTCGTGGAGTCGGCAATTGCACTGGATACGACmiRNA序列：>mmu-miR-99b-5pMIMAT Mus musculus miR-99b-5pCACCCGUAGAACCGACCUUGCGmmu-miR-99b-5p反转录颈环引物为：GTCGTATCCAGTGCGTGTCGTGGAGTCGGCAATTGCACTGGATACGACCGCAAG定量PCR反向引物为：TGTCGTGGAGTCGGC正向引物为：CACCCGTAGAACCGAC。

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