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1.HRP的底物　作为供氢体的底物化合物较多，常用的有以下几种：

(1)邻苯二胺(OPD)：OPD被认为是HRP最为敏感的色原底物之一。0PD在HRP的作用下显橙黄色，加强酸如硫酸或盐酸终止反应后呈棕黄色，最大吸收峰在492nm波长。OPD是ELISA中应用最早的底物，但其应用液稳定性差，易变色，需新配制后在1小时内使用，显色反应过程需避光，而且具有致癌性。

(2)四甲基联苯胺(TMB)：TMB是一种优于OPD的新型HRP色原底物。TMB经HRP作用后变为蓝色，加入硫酸终止反应后变为黄色，最大吸收峰波长为450nm。TMB具有稳定性好，成色无需避光，无致突变作用等优点，已成为目前ELISA中应用最广泛的底物。缺点是水溶性差。

(3)其他：5-氨基水杨酸(5-ASA)和2，2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐(ABTS)也是HRP常用的底物。

2.AP的底物　常用对-硝基苯磷酸脂(p-NPP)，p-NPP经AP作用后的产物为黄色对硝基酚，最大吸收峰波长为405nm。

3. β-半乳糖苷酶(β-Gal)的底物 常用4-甲基伞酮基-R-D半乳糖苷(4-MUU)，酶作用后，生成高强度荧光物4-甲基伞形酮(4-MU)，其敏度性较HRP高30～50倍，但测量时需用荧光计。

延伸阅读：免疫酶技术(immunoenzymatic technique)也叫酶免疫测定，是通过酶标记抗体或抗原来检测抗原或抗体的方法，其应用范围极广。显示方法是用酶的特殊底物来处理反应后的标本，通过酶催化底物的显色反应来测定抗原或抗体的存在，以酶标作定量或定性分析。标记酶有辣根过氧化物酶(HRP) 和碱性磷酸酶等，它们与抗原或抗体结合后活性不受影响。底物一般是邻苯二胺和对硝基苯磷酸酯。它具有敏感性高、特异性强，既可定性又可定量的特点。 [1]

免疫酶技术是指在一定的生物反应器内,利用酶的催化作用,进行物质转化的技术.其应用范围已遍及工业、医药、农业、化学分析、环境保护、能源开发和生命科学理论研究等各个方面。