解开DNA甲基化模式可以简化外源DNA导入宿主细胞

医学2020-10-07 11:13:20
导读DNA甲基化是一种表观遗传机制,涉及向DNA中添加甲基,调节基因表达,允许细胞区分天然DNA和外来的外来DNA,并在复制过程中标记旧的DNA链。

DNA甲基化是一种表观遗传机制,涉及向DNA中添加甲基,调节基因表达,允许细胞区分天然DNA和外来的“外来”DNA,并在复制过程中标记旧的DNA链。甲基化由称为甲基转移酶的一组酶催化,其以特定模式策略性地用甲基基团修饰DNA。

外源DNA无法隐藏

甲基化模式有助于细胞识别被认为与其DNA相关的DNA。当科学家们积极选择将外源DNA插入宿主生物体时,这可能会有问题。例如,在生物药物的开发中,宿主细胞(通常是细菌或酵母)通常用作“工厂”以产生其不会天然合成的分子或化合物,例如药物。

在许多情况下,宿主细胞将拒绝插入的DNA并将其破坏,因为DNA上的甲基化模式突出了它是外来的事实。

因此,研究人员有必要准确了解哪些甲基转移酶产生特定的甲基化模式,正如DTU Biosustain的TorbjørnØlshøjJensen所说:“有了这些知识,你可以用人工甲基化组建模型生物,模仿你想要的菌株的甲基化模式。通过这种方式你可以确保引入DNA的“生存”。“

他继续说道:“在除大肠杆菌之外的其他细菌中,你经常需要做大量的试验和错误来解决DNA变换,但这还不够好。你需要知识和工具。有了这个,你就有了系统的解决问题的合理方法。“

创建酶 - 基序偶联的“库”

研究人员创造了含有一种甲基转移酶和“盒”的质粒,这些质粒可以保存某些DNA模式的多个拷贝,称为基序。这些基序是甲基转移酶的靶标,因此通过将两者结合在一起,质粒表达的甲基转移酶以特定方式标记DNA,并且显示酶的甲基化模式。

研究小组对所有甲基转移酶重复此过程,并对质粒进行测序以揭示甲基。结果,他们创建了一个特定的酶 - 基序偶联库。

然后科学家们通过分析两种耐温细菌M. thermoacetica和A. woodii的基因组,选择验证他们的方法,名为“MetMap”。这些细菌的选择是基于它们对工业应用有很大希望。

这两种细菌总共拥有23个甲基转移酶基因,但仅对12种不同的DNA基序进行了修饰;意思是并非所有的甲基转移酶都是活跃的。研究人员能够将12个基序中的11个与特定的甲基转移酶基因结合起来。

设计具有明确“甲基化组”的宿主

使用这种相对快速的鉴定甲基化模式的方法,科学家们希望设计出具有“明确的甲基化组”的宿主。这将简化外源DNA的引入,因为宿主生物只具有想要的甲基转移酶。作者预计,他们的方法既可用于建立使用更新颖,研究较少的宿主的细胞工厂,也可用于基因表达调控和细胞分化的研究。

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