验证抗体特异性的第一个策略建议

国际抗体验证工作组(IWGAV)在9月的《自然方法》(Nature Methods)在线杂志上宣布了为解决对抗体特异性，功能性和可重复性的关键未满足需求而开发的初始策略。IWGAV是其规模和范围内的第一项举措，旨在为抗体生产商和使用者建立抗体验证的战略建议。

赛默飞世尔科技(Thermo Fisher Scientific)在2015年为IWGAV提供了财务支持，以带头制定行业标准并帮助应对与抗体特异性和可重复性相关的常见挑战。尽管抗体是科学研究中最常用的工具之一，但尚无一个全面的科学框架可用于跨研究应用程序验证抗体特异性。据估计，由于实验失败或不可靠，仅在美国，使用特征较差的抗体每年就需要花费3.5亿美元，在全球范围内要花费8亿美元。

瑞典斯德哥尔摩皇家理工学院微生物学教授MathiasUhlén博士说：“该出版物是朝着发展广泛认可的标准迈出的重要第一步，该标准用于验证抗体并确保用于生物医学研究的高质量和一致的抗体。” IWGAV。“我们期待从抗体使用者，出版商，资助机构和生产商的广泛社区中获得反馈，以帮助加强这一初步建议并确保生物医学研究这些基本工具的可靠性。”

IWGAV确定了五个“概念支柱”，以指导特定研究应用中的抗体验证：

•遗传策略：使用诸如CRISPR / Cas或RNAi的技术测量靶基因已被敲除或敲除的对照细胞或组织中的相关信号。

•正交策略：使用独立于抗体的方法对大量样品进行定量，然后检查基于抗体的定量与独立于抗体的定量之间的相关性。

•独立的抗体策略：使用两种或更多种独立的抗体，它们可以识别目标蛋白上的不同表位，并通过比较和定量分析确认特异性。

•标记蛋白的表达：修饰内源性靶基因，以添加亲和标签或荧光蛋白的序列。来自标记蛋白的信号可以与基于抗体的方法的检测相关。

•免疫捕获，然后进行质谱(MS)：偶联免疫捕获，即通过与靶标特异性抗体结合从溶液中分离蛋白质的技术，并进行MS分析，以鉴定与纯化抗体直接相互作用的蛋白质以及可能与与靶蛋白形成复合物。

尽管这些概念性支柱中的每一个都可以提供抗体特异性的证据，但IWGAV建议使用多个支柱来声明特定抗体已被充分验证可用于特定应用。《自然方法》(Nature Methods)中的手稿还包括对生产者和使用者的建议，以确保抗体随时间的可重复性。

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